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影響PCR特異性的因素供參考

日期:2025-06-16 23:04
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摘要: 影響pcr特異性的因素如下: 許多因素可以影響pcr的特異性,在此歸納,供大家參考: ①退火步驟的嚴(yán)格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。 ②減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發(fā)及錯誤延伸。 ③引物二聚體是zui常見的副產(chǎn)品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。 ④改變mgcl2(有時kcl)濃度可以改進(jìn)特異性,這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對taq酶的直接作用。 一般認(rèn)為PCR產(chǎn)物應(yīng)在48h以內(nèi)完成電泳檢測,有些zui好于當(dāng)日電泳檢測,大于48...

影響pcr特異性的因素如下:

許多因素可以影響pcr的特異性,在此歸納,供大家參考:

①退火步驟的嚴(yán)格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。

②減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發(fā)及錯誤延伸。

③引物二聚體是zui常見的副產(chǎn)品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。

④改變mgcl2(有時kcl)濃度可以改進(jìn)特異性,這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對taq酶的直接作用。

一般認(rèn)為PCR產(chǎn)物應(yīng)在48h以內(nèi)完成電泳檢測,有些zui好于當(dāng)日電泳檢測,大于48h后帶型就會出現(xiàn)不規(guī)則,甚至消失。