首先是準備各種溶液。

1、是配制溶液過程中要用到的水。水用純水，高壓滅jun之后，再去內(nèi)毒su。去內(nèi)毒su方法很多，*簡單可以放在烘箱180度3小時?；蛘哌^去內(nèi)毒su的柱子后，高壓滅jun。

2、各種溶液滅jun：

抗生su用去內(nèi)毒su水配制后，直接過濾chu菌（過0.22u濾頭）?？梢杂靡淮涡詿o菌注射器過一次性0.22u濾頭。

現(xiàn)在用的培養(yǎng)液，如果是商業(yè)化液體培養(yǎng)基，不用處理。如果是粉末，需要用去內(nèi)毒su水在生物**柜（或超凈工作臺）進行配制，再過濾chu菌?？梢韵扰錆饪s液（如10×），過濾chu菌后。再用滅jun去內(nèi)毒su水稀釋成1×培養(yǎng)液。

3、完全培養(yǎng)液的配制：

培養(yǎng)液加上合適比例的血清即可。但血清一般保存于－20℃，一般解凍是放在4℃冰箱解凍，耗時長，而且必須解決完全之后，才能進行完全培養(yǎng)基的配制。所以要提前幾個小時就將血清從－20℃轉(zhuǎn)入4℃，以期完全解凍。當然如果這一次就需要用完的話（是指用這些血清配制的培養(yǎng)液都用完），也可以放到37℃解凍。

4、*重要的是保證過程中無菌。

液體必須要分裝。無論過程中用到的培養(yǎng)液、胰酶、血清、PBS、生理鹽水、抗生su盡量分裝。分裝是為了防止污染。如果操作有誤，僅能威脅到其中一支，而非整個。

培養(yǎng)液、血清、PBS、生理鹽水分裝為20mL、50mL或100mL/管

胰酶、抗生su可分裝為1mL/管。

分裝*好先于細胞操作

5、操作之前，培養(yǎng)液先放到37度的細胞培養(yǎng)箱里復溫。原因：盡量減少對細胞的刺激。低溫對于細胞也是一個刺激因素。

6、操作之前，大腦先過一遍此次操作所需要用到的所有用具。將所有用具先放到無菌臺面上。減少拿入拿出的動作，保證無菌。（如果萬一發(fā)現(xiàn)少拿了什么，也不要緊，再加上就是。如果是槍頭盒、移液管等用具，*好先用消du酒精噴一下）。

7、操作之前，帶著的手套先噴消du酒精。然后再進入工作臺。等一分鐘，等手套上的酒精揮發(fā)之后再進行操作。