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PCR電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象探究

日期:2025-06-16 17:58
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摘要:PCR電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,就是彌散。其原因,主要從以下兩個(gè)方面考慮: 1、PCR產(chǎn)物自身原因: 往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環(huán)次數(shù)過多,而造成PCR的非特異性產(chǎn)物 過多。 對(duì)策:①減少Taq酶的量,或調(diào)換另一來源的酶.②減少dNTP的濃度.③適當(dāng)降低Mg2+濃度.④增加模板量,減少引物的用量 ,減少循環(huán)次數(shù),提高退火溫度。 2、電泳體系的問題: (1)電泳緩沖液TAE或者TBE的污染,建議更換緩沖液.(2)上樣時(shí)樣品漂了,建議增加上樣緩沖液的用量,以及小心加樣.(3)電壓太高.(4)適當(dāng)把你的膠的濃度加大...
PCR電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,就是彌散。其原因,主要從以下兩個(gè)方面考慮:
1、PCR產(chǎn)物自身原因:
往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環(huán)次數(shù)過多,而造成PCR的非特異性產(chǎn)物 過多。
對(duì)策:①減少Taq酶的量,或調(diào)換另一來源的酶.②減少dNTP的濃度.③適當(dāng)降低Mg2+濃度.④增加模板量,減少引物的用量 ,減少循環(huán)次數(shù),提高退火溫度。
2、電泳體系的問題:
(1)電泳緩沖液TAE或者TBE的污染,建議更換緩沖液.(2)上樣時(shí)樣品漂了,建議增加上樣緩沖液的用量,以及小心加樣.(3)電壓太高.(4)適當(dāng)把你的膠的濃度加大.(根據(jù)你的片斷大小而定)(5)觀察你的marker是否也存在拖尾現(xiàn)象,作為對(duì)照。