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生長抑素抗體的制備過程

日期:2025-06-16 19:35
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摘要: 生長抑素抗體的制備過程: 1. 免 疫原的制備 普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免 疫原。 小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免 疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。 2. 免 疫動物 常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。 3. 免 疫血清的收集 一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、...

生長抑素抗體的制備過程:

1. 免 疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免 疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免 疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免 疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免 疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免 疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免 疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除 菌并添加防腐劑。
抗體制備出來之后,需要進一步純化得到純的多抗或單抗,既有利于保存也有利于排除雜蛋白對結(jié)果的影響。常規(guī)用于純化的材料是腹水和細胞培養(yǎng)上清,而通常經(jīng)過免 疫制備的抗體大多數(shù)是IgG的各種亞型,以及少數(shù)是IgM,二者電泳條帶分步大致如下: