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細(xì)胞凍存的常見方法
日期:2025-06-16 18:22
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摘要:
細(xì)胞凍存的常見方法:
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的關(guān)鍵要點是慢凍快融。細(xì)胞凍存的效果主要與降溫步驟、凍存保護液的使用、凍存溫度、復(fù)溫速率及用于凍存的細(xì)胞生長狀態(tài)有關(guān)。降溫速率過快容易引起細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷,所以為防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰必須采用一個“慢”的降溫過程,并使用凍存保護劑,即凍存液。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜(DMSO)作保護劑。
根據(jù)降溫速度區(qū)分,細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。傳統(tǒng)的凍存方法是將冷凍管置于4℃ 30分鐘、-20℃ 30分鐘、-80℃過夜再轉(zhuǎn)液氮。這種...
細(xì)胞凍存的常見方法:
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的關(guān)鍵要點是慢凍快融。細(xì)胞凍存的效果主要與降溫步驟、凍存保護液的使用、凍存溫度、復(fù)溫速率及用于凍存的細(xì)胞生長狀態(tài)有關(guān)。降溫速率過快容易引起細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷,所以為防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰必須采用一個“慢”的降溫過程,并使用凍存保護劑,即凍存液。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜(DMSO)作保護劑。
根據(jù)降溫速度區(qū)分,細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。傳統(tǒng)的凍存方法是將冷凍管置于4℃ 30分鐘、-20℃ 30分鐘、-80℃過夜再轉(zhuǎn)液氮。這種凍存方法步驟多,而且需要遵守幾個時間點,容易被遺忘,對于繁忙的實驗人員而言不那么友好。而程序降溫方法,采用降溫速率-1℃~-2℃/min;當(dāng)溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min,再放至-196℃液氮保存。常規(guī)的程序降溫凍存方法較為復(fù)雜、費時,需要儀器設(shè)備花費較高,所以非程序降溫凍存方法便應(yīng)運而生,它能大大簡化凍存流程,細(xì)胞可直接置于-80°C冰箱完成凍存過程,更為簡便高效。