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介紹幾種二抗探針的優(yōu)缺點(diǎn)及其適用的實(shí)驗(yàn)
介紹幾種二抗探針的優(yōu)缺點(diǎn)及其適用的實(shí)驗(yàn):
酶:
主要有兩種不同的酶耦聯(lián)物,HRP和AP。比較而言,前者更經(jīng)濟(jì)、快速、穩(wěn)定,而后者較前者更為靈敏,通常情況下,HRP廣泛應(yīng)用于免yi 組化,western blot和ELISA中,而堿性磷酸酶(AP)更適合于固相的免yi 檢測實(shí)驗(yàn),如ELISA和western blot.
熒光基團(tuán):
FITC:FITC是廣泛使用的熒光基團(tuán),但其*大的缺點(diǎn)是淬滅快,使用抗淬滅劑可以減輕。
AMCA:常用在多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,如免yi 熒光、流式細(xì)胞術(shù)。其缺點(diǎn)是,淬滅快,且由于肉眼不能很好的檢測其所激發(fā)的藍(lán)色熒光,因而AMCA耦聯(lián)的二抗更適用于檢測大量存在的抗原。
花青染料(Cy2,Cy3,Cy5):Cy2比FITC更穩(wěn)定,且在表面熒光顯微鏡下,Cy2的熒光FITC更強(qiáng)。Cy3和Cy5比大多數(shù)熒光基團(tuán)更亮,更穩(wěn)定,背景更弱。二者常在共聚焦顯微實(shí)驗(yàn)中作多標(biāo)記。但Cy5的缺點(diǎn)是不能用表面熒光顯微鏡觀察,因此通常用具有遠(yuǎn)紅外檢測器的共聚焦顯微鏡觀察。
TRITC,RRX,TR:TRITC經(jīng)常和FITC一起用于雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,也可以使用RRX或TR,但TR會(huì)產(chǎn)生較高的背景。在使用裝有氪氫燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標(biāo)記實(shí)驗(yàn)時(shí),RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因?yàn)镽RX的發(fā)射波長在Cy2和Cy5中間,且和這兩者的重疊很少。
PE:常和FITC一起用于流式細(xì)胞術(shù)雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。